戴安娜出生在1961年7月1日傍晚时分，重7磅12盎司。她的出生并没有受到她父母的热烈欢迎，因为她是奥尔索普子爵的第三个女儿，而她父母，特别是奥尔索普子爵，希望生个男孩为斯宾塞家庭传宗接代。她的父亲称她为“身体完美的孩子”，但马上就将期待男孩降生的喜悦骤降至冰冷。这对迫切想要一个男孩子继承名号的夫妇甚至连女孩子的名字都没准备。一个星期后，这对夫妇才给她取名为“戴安娜·弗朗西丝”，“戴安娜”是斯宾塞家族一个祖先的名字，而“弗朗西丝”则是她母亲的名字。

奥尔索普子爵称戴安娜为“身体十分完美的孩子”，话中有潜台词的。在戴安娜出生前18个月，子爵夫人生过一个严重畸形的男孩，取名为约翰，可怜的约翰只活了10个小时。更为可怜的是伤心欲绝的母亲，她迫于家中长辈的压力，去医院接受了各种妇科检查，看她到底有无毛病。在那时看来，接二连三地生女孩是女方的过错。这位高傲要强、固执的子爵夫人被送到了伦敦各式各样的医院检查身体，对于年仅25岁的子爵夫人来说，这是莫大的委屈，无可忍受的的侮辱。就在那个时期，奥尔索普子爵夫妇长期不和最终离婚的种子埋下了。戴安娜的弟弟查理·斯宾塞伯爵评价过那段时期，认为那是可怕的时期，他父母从未摆脱那时期的心理创伤和阴影。

1964年，戴安娜3岁时，斯宾塞家的继承人，全家盼望的儿子降生了。这个继承人查理在威斯敏斯特教堂接受洗礼，教母是当今伊丽莎白女王。虽说东西方有别，但在继承人问题上，男尊女卑的现象都很明显。戴安娜接受洗礼的教堂是桑德林汉姆教堂，教母也只是普通的富户人家。

按照心理学家弗洛伊德的学说，特别是童年的记忆，将决定并持续影响人的一生。纵然一些人可以通过经历努力摆脱心理困扰，但心理阴影不过成为了沉睡的岩石下的熔岩罢了。戴安娜虽然年幼，但她孩子的幼小心灵仍可明显地感受到家人对自己的冷落和对弟弟的尊宠。她的心里，开始告诉自己自己是个“令人失望的孩子”，有了自卑感和无足重轻感。这种自卑感持续了她整个少女时代及进入皇室的早期，直到她投身公益活动，受到热烈爱戴时才找到了一种被认同、一种“obe”(存在)的价值感。